સેલ્યુલોઝ એસિટેટ મેમ્બ્રેન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસનો ઉપયોગ કરવા માટે અમે ગયા અઠવાડિયે ઘણી વિચારણાઓ શેર કરી હતી, અને અમે તમારા સંદર્ભ માટે આજે આ વિષયને અહીં સમાપ્ત કરીશું.
ની પસંદગી બફર એકાગ્રતા
સેલ્યુલોઝ એસીટેટ મેમ્બ્રેન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસમાં વપરાતી બફર સાંદ્રતા સામાન્ય રીતે પેપર ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસમાં વપરાતા કરતા ઓછી હોય છે. સામાન્ય રીતે વપરાયેલ pH 8.6Bઆર્બિટલ બફર સામાન્ય રીતે 0.05 mol/L થી 0.09 mol/L ની રેન્જમાં પસંદ કરવામાં આવે છે. એકાગ્રતા પસંદ કરતી વખતે, પ્રારંભિક નિર્ધારણ કરવામાં આવે છે. ઉદાહરણ તરીકે, જો ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ ચેમ્બરમાં ઇલેક્ટ્રોડ્સ વચ્ચેના પટલની પટ્ટીની લંબાઈ 8-10cm હોય, તો પટલની લંબાઈના સેન્ટીમીટર દીઠ 25V નો વોલ્ટેજ જરૂરી છે, અને વર્તમાન તીવ્રતા પટલની પહોળાઈના સેન્ટીમીટર દીઠ 0.4-0.5 mA હોવી જોઈએ. જો ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ દરમિયાન આ મૂલ્યો પ્રાપ્ત ન થાય અથવા ઓળંગી ન જાય, તો બફર સાંદ્રતા વધારવી અથવા પાતળી કરવી જોઈએ.
વધુ પડતી ઓછી બફર સાંદ્રતા બેન્ડની ઝડપી હિલચાલ અને બેન્ડની પહોળાઈમાં વધારો તરફ દોરી જશે. બીજી તરફ, વધુ પડતી ઊંચી બફર સાંદ્રતા બેન્ડના સ્થળાંતરને ધીમું કરશે, જેનાથી ચોક્કસ વિભાજન બેન્ડને અલગ પાડવાનું મુશ્કેલ બનશે.
એ નોંધવું જોઇએ કે સેલ્યુલોઝ એસિટેટ મેમ્બ્રેન ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસમાં, વર્તમાનનો નોંધપાત્ર ભાગ નમૂના દ્વારા હાથ ધરવામાં આવે છે, જે નોંધપાત્ર પ્રમાણમાં ગરમી ઉત્પન્ન કરે છે. કેટલીકવાર, પસંદ કરેલ બફર સાંદ્રતાને યોગ્ય ગણવામાં આવે છે. જો કે, પર્યાવરણીય તાપમાનમાં વધારો અથવા ઉચ્ચ વોલ્ટેજનો ઉપયોગ કરતી વખતે, ગરમીને કારણે પાણીનું બાષ્પીભવન તીવ્ર બની શકે છે, પરિણામે બફરની સાંદ્રતા વધુ પડતી વધી જાય છે અને પટલ સુકાઈ જાય છે.
નમૂના વોલ્યુમ
સેલ્યુલોઝ એસીટેટ મેમ્બ્રેન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસમાં, નમૂનાના જથ્થાની માત્રા વિવિધ પરિબળો દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે, જેમાં ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસની સ્થિતિ, નમૂનાના જ ગુણધર્મો, સ્ટેનિંગ પદ્ધતિઓ અને શોધ તકનીકોનો સમાવેશ થાય છે. સામાન્ય સિદ્ધાંત તરીકે, તપાસ પદ્ધતિ જેટલી વધુ સંવેદનશીલ હોય છે, નમૂનાનું પ્રમાણ ઓછું હોઈ શકે છે, જે અલગ કરવા માટે ફાયદાકારક છે. જો નમૂનાનું પ્રમાણ વધુ પડતું હોય, તો ઇલેક્ટ્રોફોરેટિક વિભાજન પેટર્ન સ્પષ્ટ ન હોઈ શકે, અને સ્ટેનિંગ પણ સમય માંગી શકે છે. જો કે, જ્યારે ઇલ્યુશન કલરમેટ્રિક ડિટેક્શન પદ્ધતિઓનો ઉપયોગ કરીને વિભાજિત સ્ટેઇન્ડ બેન્ડ્સનું જથ્થાત્મક રીતે વિશ્લેષણ કરવામાં આવે છે, ત્યારે નમૂનાનું પ્રમાણ ખૂબ નાનું હોવું જોઈએ નહીં, કારણ કે તે ચોક્કસ ઘટકો માટે ઓછા શોષક મૂલ્યોમાં પરિણમી શકે છે, જે તેમની સામગ્રીની ગણતરીમાં વધુ ભૂલો તરફ દોરી જાય છે. આવા કિસ્સાઓમાં, નમૂનાનું પ્રમાણ યોગ્ય રીતે વધારવું જોઈએ.
સામાન્ય રીતે, નમૂના એપ્લિકેશન લાઇનના પ્રત્યેક સેન્ટીમીટર પર ઉમેરવામાં આવેલ નમૂનાનું પ્રમાણ 0.1 થી 5 μL સુધીનું હોય છે, જે 5 થી 1000 μg ના નમૂનાના પ્રમાણની સમકક્ષ હોય છે. ઉદાહરણ તરીકે, નિયમિત સીરમ પ્રોટીન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ વિશ્લેષણમાં, એપ્લિકેશન લાઇનના પ્રત્યેક સેન્ટીમીટર પર ઉમેરવામાં આવેલ નમૂનાનું પ્રમાણ સામાન્ય રીતે 1 μL કરતાં વધુ હોતું નથી, જે 60 થી 80 μg પ્રોટીનની સમકક્ષ હોય છે. જો કે, સમાન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરીને લિપોપ્રોટીન અથવા ગ્લાયકોપ્રોટીનનું વિશ્લેષણ કરતી વખતે, નમૂનાની માત્રાને અનુરૂપ વધારો કરવાની જરૂર છે.
નિષ્કર્ષમાં, પ્રારંભિક પ્રયોગોની શ્રેણી દ્વારા ચોક્કસ પરિસ્થિતિઓના આધારે સૌથી યોગ્ય નમૂનાનું પ્રમાણ પસંદ કરવું જોઈએ.
સ્ટેનિંગ સોલ્યુશનની પસંદગી
સેલ્યુલોઝ એસીટેટ મેમ્બ્રેન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસમાં વિભાજિત બેન્ડ સામાન્ય રીતે તપાસ પહેલા ડાઘવાળા હોય છે. જુદા જુદા નમૂનાના ઘટકોને વિવિધ સ્ટેનિંગ પદ્ધતિઓની જરૂર હોય છે, અને સેલ્યુલોઝ એસિટેટ મેમ્બ્રેન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ માટે યોગ્ય સ્ટેનિંગ પદ્ધતિઓ ફિલ્ટર પેપરને સંપૂર્ણપણે લાગુ પડતી નથી.
સ્ટેનિંગ સોલ્યુશન પસંદ કરવા માટે ત્રણ મુખ્ય સિદ્ધાંતો છેસેલ્યુલોઝ એસિટેટ પટલ. પ્રથમ,મેમ્બ્રેન સંકોચન અને બાદમાંના સ્ટેનિંગ સોલ્યુશનને કારણે થતા વિકૃતિને ટાળવા માટે પાણીમાં દ્રાવ્ય રંગોને આલ્કોહોલ-દ્રાવ્ય રંગો કરતાં પ્રાધાન્ય આપવું જોઈએ. સ્ટેનિંગ પછી, પટલને પાણીથી કોગળા કરવી અને સ્ટેનિંગનો સમયગાળો ઓછો કરવો મહત્વપૂર્ણ છે. નહિંતર, પટલ વળાંકવાળા અથવા સંકોચાઈ શકે છે, જે અનુગામી શોધને અસર કરશે.
બીજું, નમૂના માટે મજબૂત સ્ટેનિંગ આકર્ષણ સાથે રંગો પસંદ કરવાનું વધુ સારું છે. સીરમ પ્રોટીનના સેલ્યુલોઝ એસીટેટ મેમ્બ્રેન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસમાં, એમિનો બ્લેક 10B નો ઉપયોગ સામાન્ય રીતે વિવિધ સીરમ પ્રોટીન ઘટકો અને તેની સ્થિરતા માટે મજબૂત સ્ટેનિંગ આકર્ષણને કારણે થાય છે.
ત્રીજે સ્થાને, વિશ્વસનીય ગુણવત્તાવાળા રંગો પસંદ કરવા જોઈએ. કેટલાક રંગો, સમાન નામ હોવા છતાં, તેમાં અશુદ્ધિઓ હોઈ શકે છે જે સ્ટેનિંગ પછી ખાસ કરીને ઘેરા પૃષ્ઠભૂમિમાં પરિણમે છે. આ મૂળ રીતે સારી રીતે વિભાજિત બેન્ડ્સને પણ અસ્પષ્ટ કરી શકે છે, તેમને અલગ પાડવાનું મુશ્કેલ બનાવે છે.
છેલ્લે, સ્ટેનિંગ સોલ્યુશનની સાંદ્રતાની પસંદગી મહત્વપૂર્ણ છે. સૈદ્ધાંતિક રીતે, એવું લાગે છે કે સ્ટેનિંગ સોલ્યુશનની ઊંચી સાંદ્રતા નમૂનાના ઘટકોના વધુ સંપૂર્ણ સ્ટેનિંગ અને વધુ સારા સ્ટેનિંગ પરિણામો તરફ દોરી જશે. જો કે, આ કેસ નથી. નમૂનાના ઘટકો અને રંગ વચ્ચેના બંધનકર્તા જોડાણની ચોક્કસ મર્યાદા છે, જે સ્ટેનિંગ સોલ્યુશનની સાંદ્રતામાં વધારો સાથે વધતી નથી. તેનાથી વિપરિત, અતિશય ઉચ્ચ સ્ટેનિંગ સોલ્યુશનની સાંદ્રતા માત્ર રંગને બગાડે છે પરંતુ સ્પષ્ટ પૃષ્ઠભૂમિ પ્રાપ્ત કરવાનું પણ મુશ્કેલ બનાવે છે. તદુપરાંત, જ્યારે રંગની તીવ્રતા ચોક્કસ મહત્તમ મૂલ્ય સુધી પહોંચે છે, ત્યારે રંગનું શોષક વળાંક રેખીય સંબંધને અનુસરતું નથી, ખાસ કરીને માત્રાત્મક માપમાં. સેલ્યુલોઝ એસીટેટ મેમ્બ્રેન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસમાં, સ્ટેનિંગ સોલ્યુશનની સાંદ્રતા સામાન્ય રીતે પેપર ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસમાં વપરાતા કરતાં ઓછી હોય છે.
બેઇજિંગ લિયુઇ બાયોટેકનોલોજી વિશે જાણવા માટેની વિગતો's સેલ્યુલોઝ એસિટેટ પટલઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ ટાંકી અને તેની ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ એપ્લિકેશન, કૃપા કરીને અહીં મુલાકાત લો:
lસેલ્યુલોઝ એસીટેટ મેમ્બ્રેન દ્વારા સીરમ પ્રોટીનને અલગ કરવાનો પ્રયોગ
lસેલ્યુલોઝ એસીટેટ મેમ્બ્રેન ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસ
lસેલ્યુલોઝ એસીટેટ મેમ્બ્રેન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ (1) નો ઉપયોગ કરતી વખતે કેટલીક બાબતો ધ્યાનમાં રાખવી જોઈએ.
જો તમારી પાસે અમારા ઉત્પાદનો માટે કોઈ ખરીદીની યોજના છે, તો કૃપા કરીને અમારો સંપર્ક કરવામાં અચકાશો નહીં. તમે અમને ઈમેલ પર મેસેજ મોકલી શકો છો[ઇમેઇલ સુરક્ષિત]અથવા[ઇમેઇલ સુરક્ષિત], અથવા કૃપા કરીને અમને +86 15810650221 પર કૉલ કરો અથવા Whatsapp +86 15810650221, અથવા Wechat: 15810650221 ઉમેરો.
સંદર્ભ:શ્રી લિ દ્વારા ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ (બીજી આવૃત્તિ)
પોસ્ટ સમય: જૂન-06-2023