હિમોગ્લોબિન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ પ્રયોગ

પ્રયોગ સિદ્ધાંત

હિમોગ્લોબિન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસનો હેતુ વિવિધ સામાન્ય અને અસામાન્ય હિમોગ્લોબિન્સને શોધવા અને તેની પુષ્ટિ કરવાનો છે.

વિવિધ હિમોગ્લોબિન પ્રકારના વિવિધ ચાર્જ અને આઇસોઇલેક્ટ્રિક બિંદુઓને કારણે, ચોક્કસ pH બફર સોલ્યુશનમાં, જ્યારે હિમોગ્લોબિનનો આઇસોઇલેક્ટ્રિક પોઇન્ટ બફર સોલ્યુશનના pH કરતા ઓછો હોય છે, ત્યારે હિમોગ્લોબિન નકારાત્મક ચાર્જ વહન કરે છે અને ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસ દરમિયાન એનોડ તરફ સ્થળાંતર કરે છે. તેનાથી વિપરીત, હકારાત્મક ચાર્જ સાથે હિમોગ્લોબિન કેથોડ તરફ આગળ વધે છે.

ચોક્કસ વોલ્ટેજ હેઠળ અને ચોક્કસ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ સમય પછી, વિવિધ ચાર્જ અને પરમાણુ વજનવાળા હિમોગ્લોબિન વિવિધ સ્થળાંતર દિશાઓ અને ગતિ દર્શાવે છે. આનાથી અલગ-અલગ ઝોનને અલગ કરવાની મંજૂરી મળે છે, અને વિવિધ હિમોગ્લોબિન્સની માત્રા નક્કી કરવા માટે આ ઝોન પર અનુગામી કલરમિટ્રિક અથવા ઇલેક્ટ્રોફોરેટિક સ્કેનિંગ વિશ્લેષણ કરી શકાય છે. સૌથી વધુ ઉપયોગમાં લેવાતી પદ્ધતિ pH 8.6 સેલ્યુલોઝ એસિટેટ મેમ્બ્રેન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ છે.

સાયટોપ્લાઝમની અંદર, ગ્લાયકોજેન અથવા પોલિસેકરાઇડ પદાર્થો (જેમ કે મ્યુકોપોલિસેકરાઇડ્સ, મ્યુકોપ્રોટીન્સ, ગ્લાયકોપ્રોટીન્સ, ગ્લાયકોલિપિડ્સ, વગેરે) માં હાજર ઇથિલિન ગ્લાયકોલ જૂથો (CHOH-CHOH) સામયિક એસિડ દ્વારા ઓક્સિડાઇઝ થાય છે અને એલ્ડીહાઇડ જૂથો (CHOCHO) માં રૂપાંતરિત થાય છે. આ એલ્ડિહાઇડ જૂથો રંગહીન જાંબુડિયા-લાલ શિફ રીએજન્ટ સાથે જોડાય છે, જાંબલી-લાલ રંગ બનાવે છે જે કોષમાં પોલિસેકરાઇડ્સ હાજર હોય ત્યાં જમા થાય છે. આ પ્રતિક્રિયાને સામયિક એસિડ-શિફ (PAS) સ્ટેનિંગ તરીકે ઓળખવામાં આવે છે, જેને અગાઉ ગ્લાયકોજેન સ્ટેનિંગ તરીકે ઓળખવામાં આવે છે.

પ્રયોગ પદ્ધતિ

સામગ્રી:સેલ્યુલોઝ એસિટેટમેમબ્રેન, ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ ઉપકરણ(DYCP-38C અને પાવર સપ્લાય DYY-6C), સુપિરિયર સેમ્પલ લોડિંગ ટૂલ(પિપેટ), સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટર, કલરમિટ્રિક ક્યુવેટ્સ, બફર્સ

બફર:

(1) pH 8.6 TEB બફર: વજન 10.29 ગ્રામ ટ્રિસ, 0.6 ગ્રામ EDTA, 3.2 ગ્રામ બોરિક એસિડ, અને 1000 મિલીમાં નિસ્યંદિત પાણી ઉમેરો.

(2) બોરેટ બફર: 6.87 ગ્રામ બોરેક્સ અને 5.56 ગ્રામ બોરિક એસિડનું વજન કરો અને 1000 મિલીમાં નિસ્યંદિત પાણી ઉમેરો.

પ્રક્રિયા:

Pહિમોગ્લોબિન સોલ્યુશનનું સમારકામ

એન્ટિકોએગ્યુલન્ટ તરીકે હેપરિન અથવા સોડિયમ સાઇટ્રેટ ધરાવતું 3 મિલી લોહી લો. 10 મિનિટ માટે 2000 આરપીએમ પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો અને પ્લાઝમા કાઢી નાખો. લાલ રક્ત કોશિકાઓને શારીરિક ખારા (750 rpm, 5 મિનિટ સેન્ટ્રીફ્યુગેશન દરેક વખતે) વડે ત્રણ વખત ધોવા. 10 મિનિટ માટે 2200 આરપીએમ પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો અને સુપરનેટન્ટને કાઢી નાખો. નિસ્યંદિત પાણીની સમાન માત્રા ઉમેરો, પછી કાર્બન ટેટ્રાક્લોરાઇડની માત્રા 0.5 ગણી ઉમેરો. 5 મિનિટ માટે જોરશોરથી હલાવો, અને પછી 10 મિનિટ માટે 2200 આરપીએમ પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો જેથી પછીના ઉપયોગ માટે ઉપલા Hb સોલ્યુશનને એકત્રિત કરો.

પટલ પલાળીને

સેલ્યુલોઝ એસીટેટ પટલને 3 સેમી × 8 સે.મી.ની સ્ટ્રીપ્સમાં કાપો. તેમને સંપૂર્ણપણે સંતૃપ્ત થાય ત્યાં સુધી pH 8.6 TEB બફરમાં પલાળી રાખો, પછી ફિલ્ટર પેપર વડે દૂર કરો અને સૂકા કરો.

સ્પોટિંગ

10 μl હિમોગ્લોબિન સોલ્યુશનને સેલ્યુલોઝ એસિટેટ પટલ (ખરબચડી બાજુ) પર, ધારથી લગભગ 1.5 સે.મી.

ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ

ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ ચેમ્બરમાં બોરેટ બફર સોલ્યુશન રેડવું. સેલ્યુલોઝ એસીટેટ પટલને ચેમ્બરના કેથોડ છેડે સ્પોટેડ બાજુ સાથે મૂકો. 30 મિનિટ માટે 200 V પર ચલાવો.

એલ્યુશન

HbA અને HbA2 ઝોનને કાપીને અલગ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં મૂકો અને અનુક્રમે 15 મિલી અને 3 મિલી ડિસ્ટિલ્ડ વોટર ઉમેરો. હિમોગ્લોબિનને સંપૂર્ણપણે દૂર કરવા માટે ધીમેથી હલાવો, પછી મિશ્રણ કરો.

કલરમિટ્રી

ઇલ્યુશન સોલ્યુશન માટે નિસ્યંદિત પાણીનો ઉપયોગ કરીને શોષકતાને શૂન્ય કરો અને શોષણને 415 એનએમ પર માપો.

ગણતરી

HbA2(%) = HbA2 ટ્યુબનું શોષણ / (HbA ટ્યુબનું શોષણ × 5 + HbA2 ટ્યુબનું શોષણ) × 100%

પ્રાયોગિક પરિણામોની ગણતરી

pH 8.6 TEB બફર સેલ્યુલોઝ એસિટેટ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ માટે સંદર્ભ શ્રેણી: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%

નોંધો

ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસનો સમય ખૂબ લાંબો ન હોવો જોઈએ. ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ દરમિયાન સેલ્યુલોઝ એસીટેટ પટલ સૂકવી ન જોઈએ. જ્યારે HbA અને HbA2 સ્પષ્ટ રીતે અલગ થઈ જાય ત્યારે ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસ બંધ કરો. લાંબા સમય સુધી ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ બેન્ડ પ્રસરણ અને અસ્પષ્ટતાનું કારણ બની શકે છે.

વધુ પડતા નમૂનાનો ઉપયોગ કરવાનું ટાળો. અતિશય હિમોગ્લોબિન પ્રવાહી બેન્ડ ડિટેચમેન્ટ અથવા અપૂરતા સ્ટેનિંગ તરફ દોરી શકે છે, પરિણામે ખોટા એલિવેટેડ HbA સ્તરમાં પરિણમે છે.

પ્રોટીન સાથે સેલ્યુલોઝ એસીટેટ પટલના દૂષણને અટકાવો.

વર્તમાન ખૂબ વધારે ન હોવો જોઈએ; નહિંતર, હિમોગ્લોબિન બેન્ડ અલગ થઈ શકશે નહીં.

હંમેશા સામાન્ય વ્યક્તિઓના નમુનાઓ અને જરૂરી જાણીતા અસાધારણ હિમોગ્લોબિનનો નિયંત્રણ તરીકે સમાવેશ કરો.

બેઇજિંગ લિયુઇ બાયોટેકનોલોજી હિમોગ્લોબિન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ માટે વ્યાવસાયિક ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ ટાંકી બનાવે છે જે મોડેલ છેDYCP-38Cસેલ્યુલોઝ એસીટેટ મેમ્બ્રેન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ ટાંકી, અને સેલ્યુલોઝ એસીટેટ મેમ્બ્રેન ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ ટાંકી માટે ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ પાવર સપ્લાયના બે મોડલ ઉપલબ્ધ છે.DYY-2CઅનેDYY-6Cવીજ પુરવઠો.

દરમિયાન, બેઇજિંગ લિયુઇ બાયોટેકનોલોજી ગ્રાહકો માટે સેલ્યુલોઝ એસિટેટ પટલ પ્રદાન કરે છે, અને સેલ્યુલોઝ એસિટેટ પટલનું કદ કસ્ટમાઇઝ કરી શકાય છે. નમૂનાઓ અને વધુ માહિતી માટે અમને પૂછવા માટે આપનું સ્વાગત છે.

બેઇજિંગ લિયુઇ બ્રાન્ડનો ચીનમાં 50 વર્ષથી વધુનો ઇતિહાસ છે અને કંપની સમગ્ર વિશ્વમાં સ્થિર અને ઉચ્ચ-ગુણવત્તાવાળા ઉત્પાદનો પ્રદાન કરી શકે છે. વર્ષોના વિકાસ દ્વારા, તે તમારી પસંદગી માટે યોગ્ય છે!

અમે હવે ભાગીદારો શોધી રહ્યા છીએ, OEM ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ ટાંકી અને વિતરકો બંનેનું સ્વાગત છે.

જો તમારી પાસે અમારા ઉત્પાદનો માટે કોઈ ખરીદીની યોજના છે, તો કૃપા કરીને અમારો સંપર્ક કરવામાં અચકાશો નહીં. તમે અમને ઈમેલ પર મેસેજ મોકલી શકો છો[ઇમેઇલ સુરક્ષિત]અથવા[ઇમેઇલ સુરક્ષિત], અથવા કૃપા કરીને અમને +86 15810650221 પર કૉલ કરો અથવા Whatsapp +86 15810650221, અથવા Wechat: 15810650221 ઉમેરો